Мобильная версия сайта Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека
Поиск по сайту
Спросить доктора
Дарим книги!
Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека

женщина

Влияние эстрадиола на метаболизм влагалищного коллагена у женщин в постменопаузе со стрессовым недержанием мочи

S.Jackson, M.James, P.Abrams

Br J Obstet Gyn, 2002, Vol 109, pp 339-344

 Введение

Настоящая работа - третья по счету публикация результатов двойного слепого плацебо-контролируемого исследования эффективности эстрогенной терапии. Ранее были опубликованы результаты влияния эстрогенов на уротелий и кровоток в сонной артерии. Коллаген, белок соединительной ткани, придающий ей прочность, вероятно, играет ключевую роль в развитии недержания мочи.  Распространение волокон коллагена в стенке влагалища, парауретральной ткани и средней порции леватора заднего прохода позволяет этой мышце контролировать расположение проксимальной части уретры. У женщин со стрессовым недержанием мочи отмечается снижение синтеза коллагена и значительное снижение общего его количества, в том числе в коже, круглых связках матки, вагинальном эпителии и пузырно-влагалищной фасции. Versi et al также отмечают корреляцию между общим уровнем коллагена в коже и параметрами уродинамики.

В течение многих лет известно, что количество коллагена падает в периоде постменопаузы. Albright впервые отметил в 10941 г, что у женщин с постменопаузальным остеопорозом истонченная кожа, что может свидетельствовать о системной атрофии тканей, а также описал увеличение частоты случаев недержания мочи в постменопаузе. Постменопаузальную потерю коллагена костной ткани можно остановить с помощью заместительной терапии эстрогенами. Повышенная экскреция гидроксипролина с мочой после менопаузы полностью предотвращается с помощью терапии эстрогенами. Введение эстрогенов также предпочтительно в лечении постменопаузального стрессового недержания мочи, хотя мнения об этом показании противоречивы. Brincat et al отметили, что у женщин в постменопаузе, получавших эстрогены в форме имплантов в течение 2-10 лет, было на 48% больше коллагена в коже, чем у их ровесниц, не получавших ЗГТ. С другой стороны, Holland et al отметили, что хотя терапия эстрогенами в поздней постменопаузе предотвращает дальнейшую потерю коллагена, нет доказательств синтеза коллагена de novo: 12 месяцев терапии приводили к повышению стабильности коллагена за счет образования перекрестных сшивок между молекулами.

Существует 19 генетически различных типов коллагена, типы I и III являются основными структурными компонентами эпителиальной ткани. Волокна коллагена этих типов стабилизированы межмолекулярными ковалентными перекрестными связями, уровень сшивок дегидро-гидроксилизино-норлейцин (ГЛНЛ) и гидроксилизино-кето-норлейцин (ГЛКНЛ) обеспечивает стабильность молекулы, гистидино-гидроксилизино-норлейцин (ГГЛ) и гидроксилизил-пиридинолин - зрелость ткани. Зрелый, медленно метаболизирующийся коллаген подвержен неферментному гликированию, и продукты этой реакции образуют дополнительные перекрестные связи, затрудняющие деградацию коллагена. Равновесие между процессами синтеза и деградации внеклеточного матрикса важен для целостности ткани, поскольку ее ремоделирование происходит постоянно. Деградация зависит от общей активности матриксных металлопротеиназ (ММП) и катепсинов, выделяющихся различными типами клеток, в том числе клетками соединительной ткани. У человека идентифицировано 11 различных представителей семейства ММП, три из которых (ММП 1, 8 и 13) способны разрушать фибриллярный коллаген, а желатиназы (ММП 2 и 9) - получающиеся в результате денатурации коллагена пептиды. Активность этих ферментов зависит от продукции проферментов или активации или от изменения уровней их эндогенных ингибиторов.

Коллаген тазовой фасции возможно играет важную роль в патогенезе недержания мочи, ранее была высказана мысль о том, что стрессовое недержание мочи в пременопаузе связано, по крайней мере, частично, с повреждением метаболизма соединительной ткани.

Методы исследования

Мы предположили, что ЗГТ эстрогенами вызовет увеличение количества или качества тазового коллагена у женщин в постменопаузе. Однако тазовая фасция недоступна вне полостного вмешательства. Поскольку предыдущие исследования показали сходство коллагена влагалищной стенки с тазовой фасцией, возможно вызванного общим происхождением влагалища и нижних отделов мочевыводящих путей, мы использовали влагалищный источник коллагена для оценки эффекта эстрогенов. Первым измеряемым параметром было количество коллагена в соединительной ткани. Однако поскольку содержание коллагена и сила ткани зависит также от других факторов, таких как межмолекулярные перекрестные сшивки, генетический тип коллагена и активность матриксных металлопротеиназ, то мы измеряли и эти величины.

Точность содержания коллагена (погрешность) составила 5%, поскольку в обеих группах - с лечением и контрольной - наблюдалось снижение общего коллагена на 25-40%, и именно небольшие различия могли иметь клиническую значимость.

Клинические методы

В исследование были включены женщины в постменопаузе с уродинамическим диагнозом стрессовое недержание мочи. После получения информированного согласия образцы вагинального эпителия из периуретральной области массой 10-30 мг были взяты биопсийными щипцами Эппендорфа под местной анестезией 2,5% лидокаином и кремом с 2,5% прилокаином. Образцы ткани хранили при -80С.

Пациентки были рандомизированы на 2 группы: получающие 2 мг эстрадиола в сутки или плацебо. И пациентки и исследователи не знали состав даваемого средства. Поскольку вводили чистый эстроген, без прикрытия прогестинами, женщинам с интактной маткой проводили ультразвуковой контроль состояния эндометрия и при необходимости биопсию эндометрия. Через 6 мес терапии брали повторную вагинальную биопсию и сохраняли при -80С. После сбора всех образцов ткани проводили их биохимический анализ.

Биохимические методы

После приготовления срезов ткани толщиной 1 мм и обработки фосфатным буфером для удаления крови образцы высушивались и разделялись на три порции. Первую порцию использовали для определения общего содержания коллагена, перекрестных связей между молекулами и продукта гликирования - эту порцию гомогенизировали, выдерживали в фосфатном буфере (0,15 М хлорида натрия, 0,1М фосфата натрия, рН 7,4) и восстанавливали борогидридом натрия, как описано Light and Bailey - для стабилизации перекрестных связей и предотвращения их гидролиза в кислой среде. Далее образцы отмывали дистиллированной водой и замораживали в сухом виде для определения сухого веса. Полный вес (до высушивания) составлял 10-30 мг.

Общее содержание коллагена

Восстановленную борогидридом ткань гидролизовали в 6М растворе соляной кислоты в течение 24 ч при 112С, далее порции гидролизата анализировали на присутствие гидроксипролина с помощью автоанализатора Chemlab, согласно методике Bannister and Burns. Поскольку гидроксипролин составляет 14% сухого веса коллагена типов I и III, его содержание, умноженное на 7,14, позволяет точно оценить общее содержание коллагена.

Межмолекулярные связи

Образцы гидролизата замораживали в высушенном виде, удаляя соляную кислоту,  затем регидратировали в деионизированной воде, после чего добавляли ледяную уксусную кислоту, а затем бутанол т.о., чтобы восстановленный образец имел соотношение бутанол: уксусная кислота: вода = 4: 1: 1 и общий объем 6 мл. Образцы пропускали через СF1 целлюлозную колонку для удаления не перекрестных аминокислотных остатков и затем анализировали с помощью LKB Alpha Plus аминокислотного анализатора, для отделения сшивок, как описано Sims and Bailey.

Продукты гликирования

Образцы гидролизата использовали одновременно для определения пиридинолина и конечного продукта гликирования - пентозидина. После замораживания в сухом виде гидролизат регидратировали в 100 мкл деионизированной воды, содержащей 1% трифторуксусную кислоту и фильтровали через 0,2 мкм-фильтр, а затем проводили ВЖХГ, как описано Bailey et al. Проводили хроматографию каждого образца на графитовой колонке Shandon Hypercarb S (4,6x100 мм). Интересующие продукты отмывались растворами 0,5% трифторуксусной кислоты и тетрагидрофурана с восходящей концентрацией от 0 до 12%. Естественная флюоресценция пиридинолина и пентозидина определялась с использованием флюориметра Perkin Elmer на 295Х/405М нм и 335Х/385М нм, соответственно.

Генетический тип коллагена

Образцы ткани выдерживали в растворе цианогена бромида в 10% муравьиной кислоте при 37С в течение 4 ч, как описано Light. Полученную смесь пептидов растворяли в натриевом додецил-сульфат-полиакриламидном геле и проводили электрофорез. Использовали буферные системы, описанные Laemmli. После электрофореза гель фиксировали и окрашивали на ночь раствором 0,1% PAGE blue 83 в 40% метаноле и 10% уксусной кислоты. После отмывания 7,5% уксусной кислотой и 5% метанолом гель сканировали с помощью лазерного денситометра LKB ultraskan XL и высчитывали количество пептидов альфа1(I)СВ8 и альфа1(III)СВ5.

Матриксные металлопротеиназы

Высушенные образцы ткани замораживали в жидком азоте и пульверизовали. Превращенную в порошок ткань экстрагировали с использованием 0,1% Brij 35, полученные образцы смешивали в отношении 1:2 по объему с невосстановленным буфером SDS и помещали в SDS-полиакриламидный гель (10%), кополимеризованный с желатином (0,5 мг/мл). Электрофорез проводили как описано ранее. После электрофореза SDS удаляли из геля путем отмывания 2,5% Triton X-100. Гель инкубировали в течение 18 ч в буфере, подходящем для протеолиза ММП (50 мМ Tris-HCl, 50 мMCaCl2, 0,8М NaCl, 1мМ аминофенил-ртути ацетат) для активации проферментов и миграции ферментов в желатин. Зоны протеолиза визуализировали окрашиванием желатина в геле с PAGE blue 83, количественную оценку ММП проводили с помощью денситометрии геля оптическим сканером.

Результаты

В исследовании приняли участие 67 женщин во временном промежутке с августа 1994 до октября 1996. Из них 55 провели влагалищную биопсию. Из них 27 вошли в группу плацебо и 28 - эстрогенов. Средний возраст составил 64 года в основной группе (51-74) и 62 в группе плацебо (49-73), средний возраст менопаузы - 13 (1-28) и 12 (1-24) лет, соответственно. 3 женщины выбыли из исследования: одна из-за смерти мужа, одна из-за дискомфорта во влагалище и одна по указанию лечащего врача из-за болей в грудной клетке. Еще трое отказались от повторной биопсии.

Т.о. полные данные были доступны у 49 пациенток, из которых 26 получали эстрогены и 23 - плацебо. Результаты исследования приведены в табл.1 По сравнению с группой плацебо в группе эстрогена произошло значительное снижение общего коллагена, ГГЛ (маркера зрелости) и конечного продукта гликирования NFC-1. Значительно повысился уровень незрелой сшивки  ГЛКНЛ. Похожие изменения происходили и с другими параметрами: снижение маркера зрелости пиридинолина, продукта гликирования пентозидина и повышения ГЛНЛ, однако разница с группой плацебо не превысила 5%. Не было отмечено влияния эстрогена по сравнению с плацебо на отношение коллагенов I и III типов.

Результаты электрофореза, экспрессии ММП (проактивная ММП) и активности (активная ММП) представлены в табл. 2. Повышение экспрессии и активности ММП 2 и 9 были отчетливо видны на второй вагинальной биопсии, независимо от группы.  Однако отмечена достоверная разница воздействия эстрогена по сравнению с плацебо в отношении экспрессии ММП-2, р=0,0017.

Обсуждение

Наши находки удивляют. Предшествующие неконтролируемые исследования отмечали более высокие уровни кожного коллагена при приеме ЗГТ в течение 2-10 лет женщинами в постменопаузе, что могло быть следствием повышения синтеза коллагена или ингибирования его потери. Наше исследование показало противоположные результаты: значительное снижение уровня коллагена после 6 мес терапии эстрогенами. Т.е. клинического улучшения состояния при лечении стрессового недержания мочи в постменопаузе эстрогенами не наблюдается. Интересно, что Falconer также отмечал похожую взаимосвязь между ЗГТ и снижением содержания коллагена в парауретральной ткани.

Снижение содержания коллагена связано с повышением протеиназной активности, повышением уровней и проактивной и активной форм ММП-2. Перед началом лечения экспрессия и активация ММП-2 были одинаковыми в основной и плацебо-группе. Поскольку ММП-9 в основном является маркером воспалительного процессе, неудивительно, что более значимый эффект за 6 мес эстрогены оказали на ММП-2, фермент, отражающий обновление ткани. Наблюдалось ткже повышение активности ММП при второй биопсии в группе плацебо, по неясной причине, однако, поскольку вторая биопсия бралась из того же места, что и первая, это повышение может быть свидетельством заживления и обновления поврежденной ткани. Однако повышение экспрессии ММП-2 и активации в основной группе достоверно выше, чем в группе плацебо. Создается впечатление, что эстрогены стимулируют деградацию коллагена путем повышения активности протеиназ.

Также создается впечатление повышенного синтеза нового коллагена в основной группе, ибо, хотя изменения отношения коллагенI/коллагенIII не происходит, но повышение уровня коллагена III свидетельствует о синтезе нового коллагена. Мы обнаружили повышение маркеров стабильности ГЛНЛ и ГЛКНЛрез 6 мес терапии эстрогенами, причем этот эффект не наблюдался в группе плацебо, и повышение ГЛКНЛ было статистически достоверно. Такое повышение свидетельствует об образовании нового коллагена. Со временем эти сшивки созревают в ГГЛ и пиридинолин, соответственно. Как и ожидалось, если старый коллаген деградирует и заменяется новым, концентрация ГГЛ и пиридинолина уменьшалась на фоне терапии эстрогенами, но статистически достоверное снижение произошло только у ГГЛ. Повышение ГГЛ в группе плацебо через 6 мес отражает процесс старения ткани.

Коллаген имеет длительный период полужизни и в течение времени присоединяет глюкозу - неферментативное гликирование ткани. Начальный продукт этой реакции может окисляться, образуя некоторые компоненты, называемые конечными продуктами гликирования. Присутствие этих продуктов является индикатором зрелости ткани. Наблюдаемое снижение конечных продуктов гликирования, NFC-1 и пентозидина, после терапии эстрогенами, поддерживает гипотезу повышенного обновления коллагена. Повышение уровня пентозидина в группе плацебо также связано со старением.

Заключение

Мы выявили значительное влияние эстрогенов на метаболизм коллагена в тазовой соединительной ткани, с повышением как его синтеза, так и деградации. В настоящее время мы не имеем доказательств того, что выявленная потеря коллагена ведет к ослаблению ткани. Замещение старого коллагена новой тканью сопровождается увеличением числа сшивок и может приводить к упрочнению ткани, несмотря на общую потерю коллагена. Необходимы дальнейшие биомеханические исследования для прояснения этого механизма. Однако отсутствие малейшего повышения общего содержания коллагена сочетается с нашими находками - отсутствием клинического улучшения за 6 мес лечения. Наши результаты не сочетаются с данными предыдущих исследований относительно костей и кожи, однако относительно парауретральной ткани были опубликованы похожие данные. Недавние исследования показали, что и стрессовое недержание мочи и пролапс могут быть проявлением патологии соединительной ткани. Возможно, что потеря коллагена после терапии эстрогенами происходит из-за исходно существующих патологических процессов в ткани, мы предполагаем, что в поврежденной ткани нарушен механизм синтеза коллагена. Ключевой вопрос, возникающий после данного исследования, - каким будет эффект долговременной терапии эстрогенами? Из-за проспективного характера нашего исследования контрольный период был короток. Возможно после деградация старого коллагена - это ранняя реакция на терапию эстрогенами. Мы имеем доказательства синтеза нового коллагена, и возможно, что более длительный период наблюдения приведет к повышению содержания общего коллагена. Мы организуем новое исследование для выяснения этого вопроса.

 Перевод Малярской М.М.

 

Читайте также:

Посткоитальная, аварийная контрацепция

Презерватив - надежность предохранения от инфекций и беременности

Причины и лечение трубно-перитонеального фактора бесплодия

Прием у гинеколога

Социально-медицинские аспекты проблемы бесплодного брака

Токсоплазмоз

Трихомониаз

Тампоны, прокладки, критические дни

Температура тела

Траволечение, фитотерапия

Транквилизаторы

Транквилизаторы и снотворные средства

Тромбофилия

Укол, инъекция

Уретрит

Хламидии у девочек

Шум в голове

Язвы

Запоры у детей

Поделиться или сохранить себе

Статьи
Лекарства
Безопасность лекарств

Рубрикатор по Мед2000.ru

Анализы

Акушерство

Аллергология

Андрология

Гастроэнтерология

Гематология

Гинекология

Дерматология

Диетология

Иглотерапия

Иммунология

Инфекции

Кардиология

Косметология

Неврология

Нефрология

Онкология

Оториноларингология (ЛОР)

Паразитология

Педиатрия

Психиатрия

Психология

Пульмонология

Ревматология

Сексология

Стоматология

Терапия

Урология

Фармакология

Хирургия

Эндокринология

Эпидемиология

Другие специальности

 

Энциклопедии

Вопросы и ответы

Анализы. Инфекции

Аллергии

Здоровый человек

Атопический дерматит

Секс

Термины

Материалы ВОЗ

Нетрадиционные методы

Сам себе 03

Прививки

Косметика

 

Лекарства

От А до Й

От К до Н

От О до С

От Т до Я

 

Психология

Рецепты

 

Врачу

Справочник врача

Научные статьи, тезисы, литобзоры, методички

Переводы

Скорая помощь

 

Рубрикатор: Анализы, Акушерство, Аллергология, Андрология, Гастроэнтерология, Гематология, Гинекология, Дерматология, Диетология, Иглотерапия, Иммунология, Инфекции, Кардиология, Косметология, Неврология, Нефрология, Онкология, Оториноларингология (ЛОР), Паразитология, Педиатрия, Психиатрия, Психология, Пульмонология, Ревматология, Сексология, Стоматология, Терапия, Урология, Фармакология, Хирургия, Эндокринология, Другие специальности:, Анестезиология Ангиология, Гепатология, Наркология, Нейрохирургия, Неонатология Ортопедия, Офтальмология, Проктология, Реаниматология, Травматология, Фтизиатрия,

Сайт Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека - www.med2000.ru (до 1999г - www.gabr.org) создан в 1998 году

©Med2000.ru, Gabr.org

Правила копирования информации с сайта Мед2000 для использования в Интернет

Представленная на сайте информация не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения и не может служить заменой очной консультации лечащего врача.

Страницу лучше просматривать при среднем размере шрифта