Мобильная версия сайта Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека
Поиск по сайту
Спросить доктора
Дарим книги!
Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека

матка, яичник, маточная труба, яйцеклетка

Аутоантитела к 3-бетагидроксистероид дегидрогеназе редко встречаются при преждевременной яичниковой недостаточности

K.Reimand, P.Peterson, H.Hyoty et al

The J. of Clin. Endocrin&Metabolism, 2000, Vol. 85, No 6, рр 2324-2326

         Преждевременная яичниковая недостаточность - это синдром, при котором менопауза наступает в возрасте до 40 лет. Это расстройство гетерогенной этиологии, в патогенезе которого могут играть роль такие факторы, как генетические или инфекционные. В качестве одной из возможных причин ПЯН предполагается аутоиммунный процесс, но его доля в структуре ПЯН до сих пор не определена. Гипотеза аутоиммунной причины ПЯН подтверждается его частой встречаемостью при других аутоиммунных эндокринных нарушениях, а также наличием у пациенток аутоантител к стероид-продуцирующим клеткам (СПК-АТ), особенно при сочетании с болезнью Аддисона, и лимфоцитарной инфильтрацией яичников, обнаруживаемой на гистологии. При реакции непрямой иммунофлюоресценции СПК-АТ реагируют с клетками, синтезирующими стероиды: коры надпочечников, теки интерны и желтого тела яичников, клетки Лейдига тестикул и плацентарные трофобласты. СПК-АТ обнаружены у 52% пациенток с ПЯН, в то же время другие исследователи обнаруживают их только у 1% пациенток.

В качестве молекулярных мишеней СПК-АТ описаны два фермента стероидогенеза: 17-альфа-гидроксилаза (Р450с17) и фермент, отщепляющий боковые цепи (Р450scc). Аутоантитела к З450с17 и Р450scc, а также к 21-гидроксилазе (Р450с21) - ферменту, экспрессирующемуся только в коре надпочечников, обнаружены в сыворотке пациенток с болезнью Аддисона при двух аутоиммунных полигландулярных синдромах (АПС). У пациентов с 1 типом АПС-1 имеются аутоантитела ко всем трем ферментам, а у пациентов с АПС2 и изолированной болезнью Аддисона преобладают аутоантитела к Р450с21. Обнаружение СПК-АТ при ПЯН, ассоциированном с болезнью Аддисона, и тесная связь этих болезней поддерживают гипотезу об общем патогенезе аутоиммунитета против надпочечников и яичников. Однако молекулярная природа аутоантигенов при ПЯН, не связанной с болезнью Аддисона (идиопатическая ПЯН), остается неизвестной.

Фермент 3-бета-гидроксистероид дегидрогеназа (3-бета ГСД) недавно охарактеризован как аутоантиген при ПЯН. Этот фермент вовлечен в стероидный обмен и экспрессируется на всех тканях, распознающих СПК-АТ. Для дальнейшего изучения этой реактивности мы определяли у пациентов с ПЯН, АПС1, АПС2, изолированной болезнью Аддисона, сахарным диабетом 1 типа (СД1) и здоровых людей из контрольной группы СПК-АТ методом ИФА и 3-бета-ГСД методом иммунопреципитации с транслированным in vitro антигеном. Мы также изучали реактивность сыворотки при ПЯН к двум другим специфическим аутоантигенам стероидных клеток: Р450с17 и Р450scc.

Материал и методы исследования

Образцы сыворотки

Образцы сыворотки от 48 пациенток из северной Англии (ср. возраст 36±11 лет, разброс от 17 до 67 лет) с ПЯН собирали в период 1992-1996 гг. ПЯН определяли на основании гипергонадотропной аменореи с сывороточными уровнями ЛГ и ФСГ более 10 МЕ/л, определенными как минимум дважды. У 30 пациенток не было обнаружено видимой причины ПЯН или других сочетающихся заболеваний, у 7 - ятрогенная или генетическая (синдром Тернера) этиология, у 11 - сочетающиеся аутоиммунные расстройства (болезнь Аддисона у 6, аутоиммунные поражения щитовидной железы у 5). Кроме того использовали сыворотку 15 финских пациентов с АПС-1, 9 финских пациентов с изолированной болезнью Аддисона, 28 финских пациентов с впервые диагностированным СД1. В качестве контроля использовали сыворотки 48 здоровых добровольцев из северной Англии и 23 - из Финляндии. От всех пациентов получено информированное согласие. Сыворотку хранили замороженной при -20С.

Непрямой иммунофлюоресцентный анализ
В качестве антигенного субстрата использовали человеческие надпочечники, плаценту, яичники, а также тестикулы макаки. Готовили срезы для криостата толщиной 6 мкм и инкубировали с тестируемой сывороткой в разведениях от 1:5 до 1:100, а затем обрабатывали иммунофлюоресцентными антителами (флюоресцирующий изотиоцианат-конъюгированный кроличий античеловеческий IgG).

Клонирование кДНК и трансляция in vitro

С-терминальный участок человеческой кДНК 3-бета-ГСД из 287 аминокислот связывали с N-концевой частью, амплифицировали методом ПЦР с 3-бета-ГСД специфическими праймерами, обрабатывали рестриктазами EcoRI, KnpI, формируя полную кДНК 3-бета-ГСД  на векторе pGEM3. Оба образца - полную кДНК (pGEM3бетаГСД) и С-концевой фрагмент (pGEM3бетаГСДС) обрабатывали праймером Т7 для формирования правильной ориентации и рамки считывания кДНК. Гены pGEM3бетаГСД и pGEM3бетаГСДС, так же как pJEX17 и pJEXscc (клонированные Р450с17 и Р450scc) транскрибировали с помощью Т7 РНК-полимеразы и транслировали в 35S-цистеин-меченный протеин. Затем продукт трансляции очищали на хроматографической колонне Сефадакс G-50 и анализировали с помощью ауторадиографии и SDS-PAGE.

Метод радиоиммунопреципитации

В каждом исследовании образец с транслированным протеином разводили в 50 мкл RIP-буфера (20 ммоль/л Tris, рН=8,0$ 150 ммоль/л хлорида натрия, 0,1% Triton X-100; 10 мкг/мл апротинина) и инкубировали с разведенной сывороткой (1:10 в RIP буфере) в течение 1 ч при комнатной температуре. 50 мкл Sepharose Fast Flow протеина, разведенного 1:5 в RIP-буфере добавляли и инкубировали в течение 1 ч при комнатной термпературе, встряхивая. Иммунные комплексы отмывали 4 раза с помощью центрифугирования, анализ проводили с помощью SDS-PAGE, а затем с помощью ауторадиографии.

Результаты

2 из 48 (4%) пациенток с ПЯН имели СПК-АТ в своей сыворотке, еще у 2 были антитела к коре надпочечников (КН-АТ). У обеих СПК-АТ-позитивных пациенток была болезнь Аддисона, так же как у 1 пациентки с КН-АТ. У второй пациентки с ПЯН и КН-АТ дополнительно было аутоиммунный гипотиреоз. СПК-АТ были обнаружены у 11 из 15 пациентов с АПС1 и у 1 из 9 с АПС2. У пациентов с изолированной болезнью Аддисона, СД1 и из контрольной группы не было СПК-АТ.

35S-цистеин-меченные продукты генов pGEM3бетаГСД и pGEM3бетаГСДС имели, как и ожидалось, связанные участки весом весом 42 и 31 кДа, соответственно, при SDS-PAGE и ауторадиографии (рис. 1). В качестве положительного контроля кроличья антисыворотка против человеческой 3-бета ГСД четко распознала оба 35S-цистеин-меченные продукта генов pGEM3бетаГСД и pGEM3бетаГСДС в реакции иммунопреципитации. Во время иммунопреципитации с человеческой сывороткой у 1 СПК-АТ позитивной пациентки с ПЯН происходила преципитация с 3бетаГСД-продуктом (1 из 41 идиопатической ПЯН, 2,4%). Другая СПК-АТ-позитивная сыворотка, так же как остальные сыворотки 46 пациенток с ПЯН оставались негативны. Кроме того, в 3 сыворотках из 15 от пациентов с АПС1, которые все были позитивны по СПК-АТ, реагировали с этим продуктом (20%). Ни одна сыворотка из 9 с АПС-2, 38 с изолированным синдромом Аддисона, 28 с СД 1 типа, 71 контрольных не была способна преципитировать с продуктом 3-бета-ГСД. При использовании для преципитации pGEM3бетаГСДС - продукта ни одного положительного связывания не было обнаружено при ауторадиографии, что показывает что эпитопы, необходимые для связывания аутоантител, локализованы в 86-аминокислотном N-концевом остатке протеина. Поскольку 10 АПС- и 1 АПС2 сывороток были позитивны по анти-Р450scc аутоантителам, сыворотки пациенток с ПЯН были проанализированы на присутствие этих антител. Однако никакой антительной реактивности этих образцов сыворотки с Р450с17 и Р450scc аутоантителами не наблюдалось.

Обсуждение

Аутоиммунная природа ПЯН предполагается в некоторых случаях,  демонстрация ключевого аутоантигена является важным шагом в доказательстве этой гипотезы. Очевидно, что ПЯН может вызываться многими факторами, такими как генетические аномалии и инфекции, и различение истинной первичной аутоиммунной этиологии от вторичной, вызванной инфецкионными, ятрогенными генетическими факторами, очень затруднено. Недавно было открыто новое доказательство аутоиммунного механизма ПЯН - связь ПЯН с DQ-аллелями лейкоцитарных антигенов с аспартатом в позиции 57.

Недавний отчет об обнаружении аутоантител к стероидогенному ферменту 3-бета-ГСД, не принадлежащему семейству Р450, в относительно большом проценте случаев ПЯН (21%) было интригующим и предположило идиопатический компонент аутоиммунной яичниковой недостаточности, отличающийся от АПС1 и болезни Аддисона. Наши результаты показали однако, что присутствие аутоантитела к 3-бета-ГСД достаточно редко (2%) у пациенток с ПЯН. Напротив, мы обнаружили аутоантитела к 3-бетаГСД в даже более высоких концентрациях (20%) среди изучаемых пациентов с АПС-1. Интересно, что все 4 образца сыворотки, позитивной по анти 3-бета-ГСД антителам преципитировали с протеином полной длины, но не с С-концевым его полипептидом, что доказывает местонахождение иммунодоминантного эпитопа в N-концевой части 3-бета-ГСД. Общий эпитоп при 1 ПЯН и 3 АПС1, в свою очередь, отражает частичное присутствие обычных аутоиммунных механизмов в патогенезе ПЯН и АПС-1.  Хотя имеющая дополнительно болезнь Аддисона 3-бета-ГСД-АТ- позитивная пациентка с ПЯН не может принадлежать к группам АПС-1 и АПС-2, поскольку не имела признаков кандидоза и гипопаратиреоза, а также СД1 или аутоиммунного гипотиреоза. Более того, не было обнаружено мутаций в ее ДНК в двух наиболее частых позициях (R257X, 1094-1106del) в аутоиммуно-регуляторном гене, вызывающем АПС-1.

В предыдущих исследованиях ни один из случаев ПЯН, позитивных по анти-3бетаГСД-АТ, не был ассоциирован с болезнью Аддисона, и только у 3 из 48 было аутоиммунное заболевание щитовидной железы, по сравнению с 6 и 5, соответственно, в нашем эксперименте. Пока непонятно как объяснить такую разницу в обнаруженной частоте 3-бета-ГСД-АТ, поскольку у 2 из 3 пациенток с ПЯН и гипотиреозом из первого исследования были 3-бета-ГСД-АТ, и большая часть пациентов в нашем исследовании с сопутствующими аутоиммунными расстройствами имела большую вероятность определения 3-бета-ГСД-АТ. Мы, кроме того, включили в исследование 7 пациенток с ПЯН ятрогенной или генетической этиологии, поскольку мы и другие авторы ранее обнаружили яичниковые антитела с помощью иммуносорбентного анализа у таких пациентов, повышающиеся после повреждения яичников, и нас интересовало, направлены ли эти яичниковые антитела напрямую против 3-бетаГСД. Мы не смогли обнаружить 3-бетаГСД-АТ у наших пациентов с СД1, хотя большой процент таких пациентов (23%) отмечался в предыдущем исследовании.

Поскольку ферменты Р450с7 и Р450scc известны как мишени СПК-АТ, мы изучали реактивность сыворотки пациенток с ПЯН с этими двумя ферментами. Ранее мы показали, что СПК-АТ в основном, если не всегда, наблюдаются при АПС-1, что приводит к их реактивности против этих двух ферментов. Все трое пациентов с АПС1 с 3-бетаГСД-АТ имели также антитела к Р45-с17 и Р450scc, но ни одна сыворотка больных ПЯН не преципитировала с этими ферментами. Отсутствие аутоантител к этим ферментами при ПЯН и АПС2 и наличие общего иммунного ответа в яичниковом и надпочечниковом аутоиммунитете предполагает наличие других аутоантигенов в стероидных клетках. Среди наших пациенток с ПЯН, сыворотки, СПК-АТ-позитивные, но 3-бетаГСД-негативные не обладали реактивностью против Р450с17 и Р450scc, что предполагает наличие еще нетипированных СПК.

Заключение

Наши находки показали, что аутоантитела к 3-бета-ГСД редко встречаются у пациенток с ПЯН, т.о. их значимость как диагностического маркера очень низка. Однако из-за расхождения с результатами предыдущих исследований, частота встречаемости и истинная клиническая значимость 3-бета-ГСД-АТ остается невыясненной и требует дальнейших исследований в этом направлении.

Перевод Малярской М.М.

 

Читайте также:

Апоплексия яичника

Беременность и роды. Деторождение и контрацепция

ВПЧ: папилломы, кондиломы

Галакторея: выделение молозива вне кормления; повышенный уровень пролактина; парлодел

Диагностический алгоритм обследования пациенток с нарушением менструального цикла в репродуктивном периоде

Интенсивная восстановительная физиотерапия женщин с хроническим воспалением тазовых органов: клинические критерии выбора фактора

Контрацепция (Часть 1, Часть 2, Часть 3)

Классификация вульвовагинитов у девочек. Этиология, патогенез и анатомо-физиологические особенности.

Потеря обоняния

Паникулит

парапроаденинэмия

Конфликт крови

Патология век

Перелет, путешествие

Правовые вопросы

Простатит

Порок сердца

Псориаз

Препараты иммуноглобулинов

Психологическая помощь

Потеря сознания, обморок

Проблемы после родов

 

Поделиться или сохранить себе

Статьи
Лекарства
Безопасность лекарств

Рубрикатор по Мед2000.ru

Анализы

Акушерство

Аллергология

Андрология

Гастроэнтерология

Гематология

Гинекология

Дерматология

Диетология

Иглотерапия

Иммунология

Инфекции

Кардиология

Косметология

Неврология

Нефрология

Онкология

Оториноларингология (ЛОР)

Паразитология

Педиатрия

Психиатрия

Психология

Пульмонология

Ревматология

Сексология

Стоматология

Терапия

Урология

Фармакология

Хирургия

Эндокринология

Эпидемиология

Другие специальности

 

Энциклопедии

Вопросы и ответы

Анализы. Инфекции

Аллергии

Здоровый человек

Атопический дерматит

Секс

Термины

Материалы ВОЗ

Нетрадиционные методы

Сам себе 03

Прививки

Косметика

 

Лекарства

От А до Й

От К до Н

От О до С

От Т до Я

 

Психология

Рецепты

 

Врачу

Справочник врача

Научные статьи, тезисы, литобзоры, методички

Переводы

Скорая помощь

 

Рубрикатор: Анализы, Акушерство, Аллергология, Андрология, Гастроэнтерология, Гематология, Гинекология, Дерматология, Диетология, Иглотерапия, Иммунология, Инфекции, Кардиология, Косметология, Неврология, Нефрология, Онкология, Оториноларингология (ЛОР), Паразитология, Педиатрия, Психиатрия, Психология, Пульмонология, Ревматология, Сексология, Стоматология, Терапия, Урология, Фармакология, Хирургия, Эндокринология, Другие специальности:, Анестезиология Ангиология, Гепатология, Наркология, Нейрохирургия, Неонатология Ортопедия, Офтальмология, Проктология, Реаниматология, Травматология, Фтизиатрия,

Сайт Библиотека Здоровья - Большая медицинская библиотека - www.med2000.ru (до 1999г - www.gabr.org) создан в 1998 году

©Med2000.ru, Gabr.org

Правила копирования информации с сайта Мед2000 для использования в Интернет

Представленная на сайте информация не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения и не может служить заменой очной консультации лечащего врача.

Страницу лучше просматривать при среднем размере шрифта